凝胶过滤填料的特点和选用要点来看看

　　凝胶过滤或尺寸排阻是一种简单、的层析方法，用于蛋白或生物大分子的纯化。

　　凝胶过滤填料是由葡聚糖苷和3-氯-1，2环氧丙烷以醚键相互铰链而成，不同型号的葡聚糖凝胶用英文字母G表示，如G-25，G-75等，G后面的数字为凝胶吸水量再乘以10。sephacryl：为葡聚糖偶联丙烯基，再和甲叉双丙烯酰胺聚合而成的介质。它有较高的硬度，能承受比普通凝胶更大的静水压力，由于属于部分大网孔型凝胶，可用于分离蛋白质、核酸、多糖和蛋白聚糖甚是病毒颗粒。

　　凝胶过滤填料特点：

　　1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物

　　2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子

　　3、载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生，分离效果可保持十几年不变。

　　作为凝胶柱层析中的关键一环，选择合适的填料是关重要的，下面我们来了解下。

　　1.当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的佳PH。

　　2.若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：

　　(1)使用通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将 样品分成不同组份。

　　(2)用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。

　　(3)体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。