浅谈常用的反相填料常选择技巧

　　聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～ 14均可使用。 相对与硅胶基质的YMC C18填料，这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白 质等样品的分离非常有效。 现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。

　　其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的 用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基 键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基 键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由 于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC， 氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。 但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用， 新型氧化锆填料也可用于HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应 用PH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难 度，其重要用途与优势尚在进行中。

　　目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3um， 5um和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填 充柱的柱效越高;小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度， 但不是的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料 是很有用的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而， 3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更 短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使 用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。