反相填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。 反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。 样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有 更强的保留。 常用的反相填料有YMC C18填料(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等。
聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1~ 14均可使用。 相对与硅胶基质的YMC C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白 质等样品的分离非常有效。 现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。
反相填料在干燥状态下为透明无孔凝胶,但是通过有机溶剂溶胀后可以变成具有分子筛性能的多孔网状结构,凝胶填料*溶胀后,孔径和排阻极限由交联度和洗脱剂决定。可以在苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、四氯化碳、二甲基甲酰胺酮及混合有机溶剂中溶胀分离。可用于亲脂性多聚物和有机洗脱溶质的分子量、结构类似物体积排阻层析,也可以分析分子体积不同、具有相同化学性质的高分子同系物。
反相填料性能:
1、高机械强度聚合物基质实现高通量纯化
2、高流速下维持高吸附容量及高分离度
3、适用于中期纯化(intermediate step)和终产品(polishing step)纯化
4、强阴离子型(Q)和强阳离子型(S)供选择
5、粒径30m(用于工业化生产)和10?m(用于高分离度纯化)供选择