凝胶过滤填料的特点和使用方法

　　凝胶过滤，或尺寸排阻，是一种简单、的层析方法，用于蛋白或生物大分子的纯化。

　　凝胶过滤填料是由葡聚糖苷和3-氯-1，2环氧丙烷以醚键相互铰链而成，不同型号的葡聚糖凝胶用英文字母G表示，如G-25，G-75等，G后面的数字为凝胶吸水量再乘以10。sephacryl：为葡聚糖偶联丙烯基，再和甲叉双丙烯酰胺聚合而成的介质。它有较高的硬度，能承受比普通凝胶更大的静水压力，由于属于部分大网孔型凝胶，可用于分离蛋白质、核酸、多糖和蛋白聚糖甚是病毒颗粒。

　　凝胶过滤填料特点：

　　1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物

　　2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子

　　3、载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生，分离效果可保持十几年不变。

　　凝胶过滤填料使用方法：

　　⒈凝胶的选择根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分子物质和小分子物质分开，由于它们在分配系数上有显著差异，这种分离又称组别分离，一般可选用SephadexG-25和G-50，对于小肽和低分子量的物质（1000-5000）的脱盐可使用SephadexG-10，G-15及Bio-Gel-p-2或4.如果实验目的是将样品中一些分子量比较近似的物质进行分离，这种分离又叫分级分离。一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶，层析过程中这些物质都能不同程度地深入到凝胶内部，由于Kd不同，最后得到分离。

　　⒉柱的直径与长度根据经验，组别分离时，大多采用2-30cm长的层析柱，分级分离时，一般需要100cm左右长的层析柱，其直径在1-5cm范围内，小于1cm产生管壁效应，大于5cm则稀释现象严重。长度L与直径D的比值L/D一般宜在7-10之间，但对移动慢的物质宜在30-40之间。

　　⒊凝胶柱的制备凝胶型号选定后，将干胶颗粒悬浮于5-10倍量的蒸馏水或洗脱液中充分溶胀，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去。自然溶胀费时较长，加热可使溶胀加速，即在沸水浴中将湿凝胶浆逐渐升温至近沸，1-2小时即可达到凝胶的充分胀溶。加热法既可节省时间又可消毒。

　　凝胶的装填：将层析柱与地面垂直固定在架子上，下端流出口用夹子夹紧，柱顶可安装一个带有搅拌装置的较大容器，柱内充满洗脱液，将凝胶调成较稀薄的浆头液盛于柱顶的容器中，然后在微微地搅拌下使凝胶下沉于柱内，这样凝胶粒水平上升，直到所需高度为止，拆除柱顶装置，用相应的滤纸片轻轻盖在凝胶床表面。稍放置一段时间，再开始流动平衡，流速应低于层析时所需的流速。在平衡过程中逐渐增加到层析的流速，千万不能超过最终流速。平衡凝胶床过夜，使用前要检查层析床是否均匀，有无“纹路”或气泡，或加一些有色物质来观察色带的移动，如带狭窄、均匀平整说明层析柱的性能良好，色带出现歪曲、散乱、变宽时必须重新装柱。